用于分子生物学的3种乙醇等级

　　乙醇在微生物学中有许多用途。它可用于生物分子的纯化和沉淀、组织学标本的染色和再染色、包埋前组织脱水和消毒。实验室常用的乙醇分为三个等级。

　　1)95%(95.6%)乙醇

　　这是您可以通过蒸馏获得的最高乙醇浓度，因为95.6%的乙醇是共沸物，这意味着气态的乙醇与水的比率与液态相同。

　　2)无水(99–100%)乙醇

　　一些对水的存在敏感的程序需要无水乙醇。生产浓度高于95%的乙醇的常用方法是使用添加剂来破坏共沸混合物并允许进一步蒸馏。因此，无水乙醇有时会含有痕量的这些添加剂（如苯）。

　　无水乙醇具有吸湿性（它会吸水），因此如果不加盖，不要指望它会长时间保持“100%”乙醇。

　　3)变性乙醇

　　变性乙醇（95%或无水乙醇）含有添加剂（例如甲醇和异丙醇），使其饮用不安全，因此免除某些饮料税。这使得它比纯乙醇便宜。在所有乙醇等级中，这是您最有可能用于实验室消毒的等级。

　　分子生物学用乙醇

　　沉淀核酸时不应使用变性乙醇，因为某些添加剂会干扰下游应用。这有点难以预测，因为添加剂因生产商而异，但最安全的是完全避免使用变性乙醇。

　　可以使用95%或100%的非变性乙醇，但在使用荧光标记的核酸时，我不使用无水乙醇，以避免残留苯产生背景荧光。

　　消毒用乙醇

　　除了成本上的显着差异之外，用于消毒的乙醇等级并不重要，因此大多数实验室使用变性股票。重要的是乙醇的最终浓度。乙醇是一种有效的消毒剂，浓度在70%到90%之间。

　　尽管这似乎有悖常理，但70%的乙醇似乎是最有效的浓度，因为90%的乙醇会凝固蛋白质，而产生的蛋白质层有效地使细胞处于休眠状态。

　　然而，在70%的浓度下，乙醇需要更长的时间才能蒸发，而且更长的接触时间意味着它能够更有效地渗透细胞。70%级的水在使蛋白质变性方面也很重要。而且70%的乙醇也往往更便宜且不易燃。（这都是相对的；它仍然非常易燃！）

　　但是，稀释乙醇时需要注意以下几点：

　　首先，稀释的乙醇不再是共沸物，因此蒸发损失会导致乙醇浓度逐渐降低。当70%乙醇的未密封烧杯“停止工作”时，不要感到惊讶。

　　其次，乙醇/水混合物没有添加剂体积。这意味着如果你想用无水乙醇制造1升70%的乙醇，你不能通过将700毫升乙醇和300毫升水混合来做到这一点。正确的方法是量取700毫升乙醇，然后加水定容至1升。

　　了解消失体积：为什么水和乙醇混合物没有附加体积？这是一个由两部分组成的答案：

　　水分子之间形成氢键，从而在水分子之间留下大量空隙。

　　乙醇分子比水分子小。

　　这两个因素意味着，当您将水和乙醇混合时，乙醇分子会占据水分子之间的空间。想象这一点的一个有用的方法是考虑沙子和岩石——如果你将每种1升混合，你不会得到2升的最终体积，因为沙子会落在岩石之间。

　　还有重要的分子间力，包括氢键和偶极-偶极相互作用，但这是另一天的故事。对于日常实验室生活，您只需要记住流体体积（即液体和气体）不一定总是相加的，并且可能存在体积消失的情况。